Isolierung und partielle charakterisierung der cyclosporin-synthetase einer cyclosporin nullmutante von beauveria nivea

Cyclosporin-Synthetase wurde aus einer Cyclosporin-BlocKm-KresolWertutante von Beauveria nivea, Stamm YP 582 isoliert. Dieses Enzym hat eine Molekularmasse in der Größenordnung der aktiven Cyclosporin-Synthetase und enthält ebenso wie diese als prosthetische Gruppe 4'-Phosphopantethein. Außerdem ist es in der Lage, alle im Cyclosporin A vorkommenden Aminosäuren zu aktivieren, alsThioester zu binden und spezifische N-Methylierungsreaktio-nen durchzuführen. Dagegen konnte eine Synthese des Undekapeptides Cyclosporin A in Gegenwart aller nötigen Substrate nicht beobachtet werden. Als Syntheseprodukt dieses Enzyms konnte das Diketopiperazin cyc/o-(D-Alanyl-N-methylleucyl) identifiziert werden. Dieses Diketopiperazin repräsentiert eine partielle Sequenz des Cyclosporin-AMoleküls. Es konnte auch im Myzel der Mutante gefunden werden, während das Myzel des Cyclosporin A produzierenden Stammes 7939/45 dieses Diketopiperazin nicht enthält. Die Ergebnisse lassen darauf schließen, daß die Unfähigkeit der Mutante, Cyclosporin A zu produzieren, auf einer Mutation der Polypeptidkette der Cyclosporin-Synthetase beruht.